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大鼠Ⅰ型胶原C端肽(CTX-Ⅰ)酶联免疫检测
浏览次数:80发布日期:2019-05-10

大鼠Ⅰ型胶原C端肽(CTX-Ⅰ)酶联免疫

      检测试剂盒使用说明书         AE90833Ra

使用前仔细阅读本说明书。酶联免疫试剂盒是基于双抗体夹心技术原理,来检测大鼠Ⅰ型胶原C端肽(CTX-Ⅰ),只能用于研究用途,不得用于医学诊断。

    用于大鼠血清•●、血浆及相关液体样本中Ⅰ型胶原C端肽(CTX-Ⅰ)测定。

工作原理

本试剂盒采用的生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法ELISA)测定样品中大鼠Ⅰ型胶原C端肽(CTX-Ⅰ)水平。向预先包被了大鼠Ⅰ型胶原C端肽(CTX-Ⅰ)单克隆抗体的酶标孔中加入大鼠Ⅰ型胶原C端肽(CTX-Ⅰ),温育;温育后,加入生物素标记的抗Ⅰ型胶原C端肽(CTX-Ⅰ)抗体。再与链霉亲和素-HRP结合,形成免疫复合物,再经过温育和洗涤,去除未结合的酶,然后加入底物A•●、B,产生蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中大鼠Ⅰ型胶原C端肽(CTX-Ⅰ)的浓度呈正相关。

试剂盒组成 

试剂盒组成

48孔配置

96孔配置

保存

说明书

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶标包被板

1×48

1×96

2-8℃保存

标准品160 nmol/L

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃保存

标准品稀释液

3ml×1

6ml×1

2-8℃保存

链霉亲和素-HRP

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

生物素标记的抗CTX-Ⅰ抗体

0.5ml×1

1 ml×1

2-8℃保存

显色剂A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

显色剂B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

终止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃保存

浓缩洗涤液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃保存

 

 

需要而未提供的试剂和器材

 

  • 37恒温箱。
  • 标准规格酶标仪。
  • 精密移液器及一次性吸头
  • 蒸馏水,
  • 一次性试管
  • 吸水纸

 

注意事项

 

  • 从2-8℃取出的试剂盒,在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
  • 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差
  • 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
  • 免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和封板膜。
  • 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
  • 底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。

 

洗板方法:

手工洗板方法:甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内,浸泡1-2分钟。根据需要,重复此过程数次。

自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中

 

标本要求: 

1.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

2.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但避免反复冻融。

 

操作程序:

  • 标准品的稀释:(本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。)

80nmol/L

5号标准品

120μl的原倍标准品加入120μl标准品稀释液

40nmol/L

4号标准品

120μl的5号标准品加入120μl标准品稀释液

20nmol/L

3号标准品

120μl的4号标准品加入120μl标准品稀释液

10nmol/L

2号标准品

120μl的3号标准品加入120μl标准品稀释液

5nmol/L

1号标准品

120μl的2号标准品加入120μl标准品稀释液

 

  • 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
  •  加样:1)空白孔,空白对照孔不加样品,生物素标记的抗CTX-Ⅰ抗体,链霉亲和素-HRP,只加显色剂A&B和终止液,其余各步操作相同;2)标准品孔:加入标准品50ul,链霉亲和素-HRP50ul(标准品中已事先整合好生物素抗体,故不加);3)待测样品孔:加入样本40ul,然后各加入抗CTX-Ⅰ抗体10ul•●、链霉亲和素-HRP50ul,盖上封板膜,轻轻震荡混匀,37℃温育60分钟。 
  • 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
  • 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
  • 显色:每孔先加入显色剂A50ul,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟. 
  • 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
  • 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后10分钟以内进行。
  • 根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。

     

    操作程序总结:

     

    试剂盒性能:

    1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.92以上。

    2.批内与批间应分别小于9%和15%

     

    检测范围:

    检测范围:3nmol/L - 80nmol/L

     

    保存条件及有效期:

    保存:2-8。

    有效期:6个月(2-8℃)。

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